Vous trouvez au sein de cette liste déroulante, les différents équipements qui composent la plateforme IMA’CRI :

Le microscope confocal inversé Zeiss LSM 780, piloté par le logiciel ZEN équipé d’une chambre thermostatée, est totalement motorisée et permet l’observation sub-cellulaire d’échantillons fixées ou de cellules vivantes. Ce microscope est équipé d’une barette spectral permettant de faire jusqu’à 8 couleurs en simultané et d’un détecteur de haute résolution permettant d’améliorer la résolution d’un facteur 1,7.

Confocal Zeiss LSM 780 Airyscan

Technologies associées :

Imagerie 2D

Imagerie 3D

FRAP photoactivation

FRET ratiométrique

Imagerie spectrale

Imagerie haute résolution

 Objectifs disponibles

Objectifs Ouverture Numérique Immersion
X10 Plan Apo 0.45 DF= 2,1 mm sec
X40 W C-Apo 1.2 DF= 280 µm eau
X40 DIC Plan Apo 1.3 DF= 200 µm huile
X63 DIC Plan Apo 1.4 DF= 190 µm huile

Les sources lasers 

– Diode 405nm, 30mW

– Laser Argon, raies à 458, 488, 514 nm, 25mW

– Diode à 561nm, 20 mW

– Diode 633 nm, 5mW

Les détecteurs

2 PMT (photocathode à revêtement multialcalin), dont un refroidi

1 PMT transmission

1 multiPMT (photocathode GaAsP) 32 canaux refroidi pour la détection spectrale.

1 détecteur Airyscan constitué de 32 détecteurs GaAsP organisés en nid d’abeille

Le microscope confocal droit Sp8 Leica, piloté par le logiciel LAS X qui permet l’observation sub-cellulaire d’échantillons fixées ou de cellules vivantes. Il est équipé d’un logiciel de déconvolution permettant d’améliorer la résolution.

Confocal Leica Sp8 droit

 

Technologies associées:

Imagerie 2D

Imagerie 3D

Imagerie multiphoton

Objectifs disponibles

Objectifs Ouverture Numérique Immersion
X25 PL IRAPO 0.95 DT= 2,5 mm eau
X40 PLAN APO 1.3 DT=240 µm huile
X63 PLAN APO 1.4 DT = 280 µm huile

Les sources lasers 

– Diode 405 nm, 50 mW

– Argon Multilines à 458, 488, 514 nm, 65 mW

– Diode à 561 nm, 20 mW

– Diode 633 nm, 10 mW

– Laser IR Coherent Chameleon Vision II précompensé accordable de 680 1080 nm . Il possède (500-550, 565-605) pour une observation maximale.

Les détecteurs

Il est équipe de 2 PMTs et d’un détecteur HyD

Ce microscope inversé permet de réaliser des times lapses en lumière transmise et en fluorescence sur cellules vivantes. Il permet également de faire du TIRF.

Filtres

GFP/mRFP EX DBP 480/30 + 565/25. EM DBP 525/31 + 616/57

Vidéomicroscope Zeiss

Il est équipé :

– d’une chambre thermostatée et régulée en CO2 pour étude sur cellules vivantes

– d’une platine motorisée XYZ

– d’une caméra haute Résolution Cool Snap HQ2

– d’une caméra Evolve EMCCD

– d’une DG4 avec filtre Fura2 permettant la détection de Calcium

 

Objectifs disponibles

Objectifs Ouverture Numérique Immersion
X2.5 Plan-Neofluar 0,075 df=9,5 mm sec
X5 Plan-Neofluar 0,16 df= 18,5 mm sec
X10 Ph 1 Plan-Neofluar 0.5 df= 5,2 mm sec
X20 Ph2 Plan-Neofluar 0.5 df= 2 mm sec
X40 DIC Plan-Apo 1.3 df= 0,2 mm huile
X63DIC Plan-Apo 1.4 df= 0,19 mm huile
X100 DIC Plan-Apo 1.46 df= 0,10 mm huile

Blocs filtres

Monobande HE Multibandes Multibandes
DAPI EM EX G 365BP 445/50 GFP/mRFP DAPI/GFP/Cy3/Cy5
eGFP EX BP 470/40, EM BP 525/50 CFP/YFP  
CFP EX BP 550/25, EM BP 480/40 Fura 2, EX BP 340/30, EM BP 690/50  
YFP EX BP 500/25, EM BP 535/30    
Cya3 EX BP 436/25, EM BP 605/70    
Cya5 EX BP 640/30, EM BP 690/50    

 

Suivi de cellules vivantes en lumières transmise et fluorescence
 

Station d’analyse d’image

Imaris est un logiciel de reconstruction 3D/4D, édité par la société Bitplane. Il permet de visualiser, les images prises en microscopie photonique, par reconstruction volumique et surfacique. IL est en libre service sur la Plate-Forme après réservation sur le site de ressources du CRI.

Bactéries (Alexa 568) phagocytées par les macrophages (WGA Alexa 488)

Fiji est très complet pour l’analyse d’image (co-localisation, traitement de stacks (pile d’images), colorimétrie, recherche de contours, segmentation, projection z, overlay, filtres, 3D, création d’animations .AVI .GIF, déconvolution 3D, …) et permet de créer des macros.

Site officiel: https://imagej.net/Fiji

 

Les systèmes et réactifs X-CLARITY ™ standardisent, simplifient et accélèrent chaque étape du processus de nettoyage des tissus. Avec la méthode CLARITY, les tissus préservés sont intégrés dans une matrice d’hydrogel et les lipides sont activement extraits par électrophorèse pour créer un hybride tissu-hydrogel stable et optiquement transparent qui est chimiquement accessible pour plusieurs cycles d’étiquetage et d’imagerie des anticorps. La cytoarchitecture native reste intacte et même les protéines de fluorescence endogènes sont préservées pour une imagerie de fluorescence robuste en aval.

Clarification d’un rein par le système X Clarity / Rein Clarifié Glomérule FITC

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